首先,破碎植物细胞.
然后,根据所需要的酶的结构和溶解性质,选择适当的溶剂提取.为了提高提取率,防止酶变性失 活,在提取过程中要注意控制好温度,pH值等提取条件.
第三,离心分离、过滤与膜分离、沉淀分离、层析分离、电泳分离、萃取分离、结晶等.
具体的设备要根据你的实验材料来定哦,少量的话用一般的实验室玻璃仪器就够用了,比如说,冷凝回流管,分液漏斗,至于设备的话就不清楚了哦~
如何提取植物叶片细胞液里面的酶？
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酶提取法
天然植物的细胞壁由纤维素构成，其中植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内。酶提取法就是利用纤维素酶果胶酶蛋白酶等（主要是纤维素酶），破坏植物的细胞壁，以促使植物有效成分很大限度溶解分离出的一种方法。在酶提取法的提取工艺中，酶的选择、酶浓度、pH值、酶解温度、酶解时间都会影响植物提取物的提取率。
E. BARZANA等人采用酶提取法从万寿菊提取类胡萝卜素，主要研究了料液比、酶浓度、酶解时间和温度等对提取率的影响，研究结果表明很佳提取工艺为：料液比1∶4、酶浓度0.3%、提取时间为1.5h、温度为25℃。张小清等人采用酶提取法提取银杏中的活性成分—黄酮，并通过正交实验找出酶浓度、pH值、酶解温度和时间等影响提取率的很佳工艺条件。（一）水溶液提取法（二）有机溶剂提取法
急！请问哪位大神知道测定植物apx酶活时，怎么测定酶液1. 酶液制备 取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。
2. 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
要测胰蛋白酶活，可是植物胰蛋白酶怎么制备啊？反胶束萃取制备胰蛋白酶
胰蛋白酶（EC 3 . 4 . 4 . 4 ）是从猪、牛等哺乳动物胰脏提取的一种以丝氨酸为活性中心的蛋白水解酶，可提高组织、血管的通透性、液化血块、血脓纤维及坏死组织等，用于治疗炎症、溃疡、创伤等引起的脓肿及支气管炎、肺气肿等。
( 1 ）工艺流程
( 2 ）主要步骤
① 制备粗酶液 称取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性为25 . 7U /mg，胰淀粉酶活性为18.4U/mg，胰脂肪酶活性为63.7U/mg。将其用pH 值为5 . 25 、浓度为0．2mol / L 的乙酸-乙酸钠缓冲液溶解，然后进行真空过滤，收集滤液并用磷酸缓冲液进行稀释，使胰蛋白酶活性为3-10U / mg ，备用。
② 制备反胶束 将AOT置于100 ℃ 烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷却至室温。然后称取44.4369 置于配制罐中，加入10L异辛烷，在搅拌下使其形成均匀的分散液，再加入定量蒸馏水，在200r/min的转速下处理2h ，获得浓度为0 .lmol / L 的透明AOT-异辛烷反胶束溶液。使用时用异辛烷稀释10 倍。
③ 萃取 将稀释10 倍的AOT-异辛烷反胶束置于萃取器中，按照AOT 异辛烷反胶束：粗酶溶液体积比为（2 -3 ) : 1 的比例加入粗酶溶液萃取3 - 4 次，，在300 - 400r / min 的转速下萃取5 -10min 。如此每次萃取完成后，均进行离心分离，离心机转速为4000 - 6000r / min ，时间10 -15min 收集、合并离心上层清液，进行反萃取，下层萃余液用于制备胰脂肪酶。
④ 反萃取 将荷载胰蛋白酶的AOT -异辛烷反胶束置于萃取器中，在搅拌下加入等体积的反萃取液进行反萃取15 -20min 萃取液为0．02 -0.05mol / L 的NaCI 溶液。如此反萃取3 次，每次萃取完成后，均进行离心分离，离心机转速为4000 -6000r / min,时间为15 -20min 。分别收集、合并离心上层清液和下层反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶，后者进行超滤浓缩。
⑤ 脱盐、浓缩 将反萃取液置于截留分子量2 万的超滤膜中，在0 . 1 ～0.2MPa 的压力下进行脱盐及浓缩处理，直至处理液体积降低至原液体积的1 / 5 左右时停止，获得脱盐浓缩液。
⑥ 干燥 将浓缩液置于冻干瓶中，在-60～-50 ℃ 、真空度为25～5OMPa 的条件下干燥24h ，获得纯化胰蛋白酶冻干粉。
( 3 ）主要指标
浅黄色粉末，胰蛋白酶的总萃取率为74 . 2 % ，胰蛋白酶活性为3145 . 3U/ mg ，纯化45 . 16 倍；胰淀粉酶活性为0 . 58U / mg ，降低4 . 66 倍；无脂肪酶活性。
实例234 猪胰中分离核糖核酸酶A、胰蛋白酶、凝乳蛋白酶和激肚释放酶
采用提取、盐析、反胶束、离子交换、凝胶分子筛层析等技术，可从猪胰脏中同时获得核糖核酸酶A 、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和激肤释放酶，有显著的经济效益。
( 1 ）用该方法同时制备上述四种酶的工艺流程
( 2 ）主要步骤
① 提取、盐析 取0.5kg 猪胰，除脂肪及结缔组织后绞碎，加入其3 倍质量的乙酸提取液搅拌提取24h 。提取液温度为4 ℃ ，pH 值为4 . 0 ，硫酸浓度为0．125mol / L 。提取完成后用4 层纱布过滤，收集滤过液约1250-1300mL ，在搅拌下加入约750g 固体硫酸钱溶解，使溶液达到75 ％饱和度。4000r / min 转速离心15min , 分别收集上层清液（约1500mL ）和盐析沉淀物（约40 -45g ）。
② 制备核糖核酸酶A 取收集的上层清液，在搅拌下加入固体硫酸铵溶解，使溶液达到85 ％饱和度。4 000r / min 转速离心15min ，弃清液。将沉淀溶于等体积蒸馏水，用10 ％乙酸钠调节pH 值为6 . 0 ，上用浓度为0 .0lmol / L 、pH6 .0磷酸缓冲液（PBS ) 平衡过的CM - SepharoseFF 柱，CM - SepharoseFF 用量与上柱液体积之比为1 : 5 ( g / mL ）。接着用2 倍树脂床体积的上述平衡缓冲液洗涤荷载核糖核酸酶A 的CM -SepharoseFF 色谱柱后，分别用0．01mol / L 、pH6 ．0和0．lmol / L 、pH7 . 5 磷酸缓冲液进行梯度洗脱，收集活性峰液，调节其pH 值为8 . 0 ，上用0．05mol / L 、pH 8 . 0 磷酸缓冲液平衡的Sephacryls -200 柱，Sephacryls -200 用量与上柱液体积之比为1 : 5 （g/mL ）。然后用同样的缓冲液梯度洗脱，收集活性峰液，进行透析、脱盐、冻干，获得核糖核酸酶A 冻干粉。
③ 制备胰蛋白酶取75 ％饱和度的硫酸钱盐析沉淀，用10 倍蒸馏水溶解，加入盐析沉淀质量30 ％的CaCI ：粉末，调节pH 值为8 . 0 ，再加入5 ～ 10mg 粗胰蛋白酶，于4 ℃ 下激活24h 。过滤除去硫酸钙沉淀，调节滤液pH 值为7 . 8 ，加入定量对氨基苯甲脒－sepharose6B ，搅拌下吸附lh ，纱布过滤，收集滤液用于分离其他酶。将吸附胰蛋白酶的对氨基苯甲眯一S 叩harose6B 树脂用pH 值为7 . 8 、浓度为0 . lmol / L Tris 一0 .05mol / L HCI 的缓冲液（含0 . lmol / L CaC12 ）抽滤洗涤，缓冲液用量为树脂体积的2 倍。洗涤完成后将树脂装柱，用其1 倍体积的相同缓冲液平衡。再用20 倍树脂体积的0 . lmol / L 甲酸-0 . 05mol / L KCI 缓冲液洗脱，洗脱液pH 值为2 . 2 ，洗脱流速为2 ～3 倍树脂体积／h 。收集洗脱活性峰进行透析，冻干，获得胰蛋白酶。
④ 弹性蛋白酶制备取未被对氨基苯甲脒-Sepharose6B 吸附的滤液，对水透析至透析管内产生沉淀时止。用400Or / min 的转速离心15min ，收集上层清液用于制备弹性蛋白酶。沉淀用5 ～ 6 倍体积的Tris-HCI 缓冲液溶解，该缓冲液浓度为0．02mol / L 、pH 值为8 . 8 。将溶解液用稀NaOH 调节pH 值为10 . 4 ，上用上述缓冲液平衡好的DEAE －纤维素柱，溶解液与DEAE -纤维素的比为（5 ～6 ) ： 1 ( mL / g ）。上柱完成后再用同样的缓冲液以2 ～3 倍树脂体积／h 的流速洗涤，缓冲液用量为1 倍树脂体积。弹性蛋白酶在此条件下不被交换，收集洗涤活性峰，对水透析，冻干，即得弹性蛋白酶。比活力2010U / mg ，活力回收10 ％。
⑤ α-糜蛋白酶制备 将制备弹性蛋白酶时的离心清液用乙酸钠调节pH 值为5 ．0，上用0 . lmol / L 、pH 5 . 0 柠檬酸缓冲液平衡的S- SepharoseFF 柱。用2 倍柱体积的、同样缓冲液以3mL / min 洗涤树脂，收集洗涤液待制备激肤释放酶。用300mL 0 . 01～0.05mol / L 、pH5.0柠檬酸缓冲液梯度洗脱，收集活性峰组分( 160 ～200mL ) ，透析，冻干，即得α-糜蛋白酶。
⑥ 胰糜蛋白酶制备 取制备弹性蛋白酶时的离心上层清液，用乙酸钠调节pH 值为3 . 5～ 4 . 0 ，加入等体积0.lmol / L AOT 反胶束，在200r /min 搅拌下萃取5min , 4000r / min 离心5min 。收集上层有机相，萃余液再用等体积0.lmol / L AOT 反胶束重复萃取2 次。合并有机相，加入等体积、含lmol / L KCI 、pH8.0的0.02mol / L 碳酸盐缓冲液，在200r /min 搅拌下反萃取5min , 60 00r/min 离心5min ，收集下层水相，萃余液同法反萃取2 次。合并反萃取液，对水透析脱盐，冻干，得胰糜蛋白酶。
⑦ 激肽释放酶制备 取用0.01mol/ L 、pH 5.0柠檬酸缓冲液洗涤S-SepharoseFF 柱的洗涤液，用柠檬酸调节pH 值为4 . 5 ，按洗涤液：丙酮=1：0.35 的比例加入丙酮，于-4 ℃ 冰箱中放置2h , 过滤。滤液中加入乙酸钠和NaCI ，使其浓度分别达到0.O65mol / L 和0.035mol / L 。继续加入丙酮，使体积比达到65 ％。抽滤，滤饼用少量蒸馏水溶解，用稀乙酸调节pH 值为4 . 2 ，再次产生沉淀。抽滤，滤饼用少量蒸馏水溶解后用稀乙酸钠调节pH 值为6 . 8 ，对水透析脱盐后上用浓度为0.1mol / L 、pH6 . 8 磷酸缓冲液平衡的轻基磷灰石柱，上柱液与经基磷灰石的比为（5 ～ 6 )：l ( mL / g ）。用0 . 01 ～0.2mol/L 、pH6 . 8 磷酸缓冲液以1～ 1 . 5 倍树脂柱体积／h 进行梯度洗脱，洗脱液用量约为上柱液体积的1～1 . 5 倍。收集活性峰组分，对水透析脱盐后加到经过重新平衡的另一羟基磷灰石柱上，改用0.05 ～0.2mol / L 、pH6 . 8 磷酸缓冲液进行梯度洗脱。收集活性峰组分，再次对水透析脱盐后，冻干，获得激肽释放酶。
( 3 ）主要指标
核糖核酸酶A 的活力回收≥75 。％，比活力为71000U/mg；胰蛋白酶的活力回收≥60 % ，比活力为23750U / mg ；弹性蛋白酶的活力回收≥10 % ，比活力为2010 U / mg ；胰糜蛋白酶活力回收≥70 % ，比活力为150U / mg ；胰激肤释放酶活力回收≥6 % ，比活力为130U / mg 。
